PCR擴增試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術

　　PCR擴增試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進行快速核酸擴增反應。本試劑盒在42?C下，依賴核酸外切酶的作用，加入根據模版設計的特異的分子探針，使用熒光監(jiān)測設備能實現對目標片段擴增過程的實時監(jiān)控。適用于實驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。
 

　　PCR擴增試劑盒操作需要提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。
 

　　1)每個干粉反應管加入29.4μLAbuffer(注意：Abuffer需融化混勻，否則會對實驗效果產生影響)；
 

　　2)每個反應管分別加入2μL上游引物、2μL下游引物和0.6μL探針(引物和探針濃度為10μM，對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中)；
 

　　3)向反應管中依次加入11.5μLddH2O和2μL核酸模板(可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為13.5μL)；
 

　　4)向反應管中加入2.5μLBbuffer并充分混合(對于多個反應，建議將Bbuffer加至反應管的蓋子內側，上下顛倒反應管8-10次混勻)；
 

　　5)混勻后，將反應液甩(或快速離心)至管子底部，然后立即將反應管放入熒光檢測設備中。熒光檢測程序設置為：恒溫42C；每30s采集一次FAM通道(信號采集通道的選擇與熒光探針設計一致)熒光值；反應時間20mins。