錐蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，產品僅用于科研在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

錐蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。產品僅用于科研
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。產品僅用于科研
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應（20  μL 體系，在樣品制備室進行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。產品僅用于科研
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
探針法：
aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時，熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
以下是公司正在銷售的產品：

PCDHGB2  原鈣粘蛋白γB2抗體EuGOYn LT 100 瓊脂培養基基礎EuGOYn LT 100 Agar Medium Base

PCDHGB1  原鈣粘蛋白γB1抗體培養基

PCDHGA9  原鈣粘蛋白γA9抗體LT 100 瓊脂基礎LT 100 Agar Base

PCDHGA8  原鈣粘蛋白γA8抗體卵脂多價胨稀釋液基礎Lecithin PolysorbateLPDiluent

PCDHGA7  原鈣粘蛋白γA7抗體改良 Letheen 瓊脂基礎Letheen Agar Modified

錐蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒PCDHGA5  原鈣粘蛋白γA5抗體pH7.0 緩沖化鈉蛋白胨溶液Buffered  Sodium  Chloride  peptone  Solution pH 7.0

PCDHGA4  原鈣粘蛋白γA4抗體SCDLP 瓊脂基礎SCDLPA Base

PCDHGA3  原鈣粘蛋白γA3抗體SCDLP 液體培養基基礎Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate BaseBroth

PCDHGA2  原鈣粘蛋白γA2抗體Dey/Engley 中和肉湯基礎Dey/Engley Neutralizing Broth Base

PCDHGA12  原鈣粘蛋白γA12抗體大豆-酪蛋白消化物液體培養基Fluid Soybean-Casein Digest Medium

PCDHGA11  原鈣粘蛋白γA11抗體無菌采樣袋/均質袋

PCDHGA10  原鈣粘蛋白γ10抗體培養基

PCDHGA1  原鈣粘蛋白γA1抗體平板計數瓊脂PCA

PCDHB7  原鈣粘蛋白β7抗體平板計數瓊脂平板PCA

PCDHB5  原鈣粘蛋白β5抗體酸鹽緩沖液pH7.2登革熱病Ⅰ、Ⅱ型PCR檢測試盒低溫運輸，-20℃保存50T

刀豆球蛋白 A ⅢCon A Ⅲ4℃保存50mg

刀豆蛋白 A IV Con A Type IV-20℃保存25mg

蛋白質電泳分子量標準（3.3-20.1 KD）Protein Marker-20℃保存15次

蛋白質電泳分子量標準(14.4-97.4 KD)Protein Marker-20℃保存20次

蛋白質電泳分子量標準 (43-200 KD)Protein Marker-20℃保存10次

蛋白折疊試盒Protein Folding Kit4℃保存100次

蛋白去除試SOxidative Stress Detection Kit常溫保存3g

蛋白去除試MOxidative Stress Detection Kit常溫保存5 g

蛋白酶抑制混合液Protease Inhibitor Cocktail-20℃保存2×0.5mL