人椎間盤髓核組織提取物

培養步驟:
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

椎間盤是位于人體脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個密封體。公司科技提供來自新鮮或冷凍人椎間盤髓核組織中高質量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院，采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人椎間盤髓核組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態影響較大，一旦細胞狀態不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，進口來源，保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養的優點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關產品： 

0.094ng/mlD-Tetrahydropalmatine；右旋四巴馬汀 輕鏈鐵蛋白檢測試盒

9.375pg/mlTetrahydrocucumin；四姜黃素化可的松檢測試盒

0.188ng/mlSodium cholate；膽鈉青少年2型色素沉著癥/幼年型色病相關蛋白2檢測試盒

0.938ng/mlJatrorrhizine；藥根親環蛋白A檢測試盒

9.375pg/mlCarnosic acid；鼠尾草切除修復交叉互補基因1檢測試盒

18.75pg/ml1-Hexadecanol；十六醇/棕櫚醇 GC≥99%鞘脂激活蛋白原檢測試盒

0.094ng/mlVitexin；牡荊素鞘脂檢測試盒

0.188ng/mlPuerarin；葛根素鞘氨醇激酶1檢測試盒

1.875ng/mlRibavirin；利巴韋林鞘氨醇檢測試盒

9.375pg/mlL-Citrulline；L-瓜氨橋粒芯糖蛋白3抗體檢測試盒
人椎間盤髓核組織提取物S抗原(SAG)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)卡格列凈半水；坎格列凈半水

蛋白激酶Cζ(PKCζ)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)5'-二胞苷三鈉鹽

白介素5(IL5)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)2,3-二苯并呋喃

尼克酰胺腺嘌呤二核苷氧化酶4(NOX4)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)dT亞酰胺單體

Smad同源物4(Smad4)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)Bz-2'-脫氧胞苷亞酰胺單體

趨化因子C-C-基元受體4(CCR4)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)匹多莫德

管生成素樣蛋白2(ANGPTL2)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)匹多莫德（標準品）

干擾素γ誘導單核因子(MIγ)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)羥基氯喹

蛋白激酶Cα(PKCα)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)酰唑胺

防御素α5(DEFα5)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)O-6-芐基鳥嘌呤，MGMT 的抑制

溶菌酶(LZM)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)竹紅菌素(標準品)

煙型膽受體α4(CHRNα4)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)氟米龍

酰肽受體2(FPR2)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)氟米龍(標準品)

布魯東氏酪氨激酶(Btk)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)阿西美辛

• 脂酰絲氨受體(PSR)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)阿西美辛(標準品)